Сайты интеграции трансгенов

Сайты интеграции трансгенов

Сайты интеграции трансгенов * сайты інтэграцыі трансгенаў * integration sites of transgenes — специфические сайты, используемые для включения трансгенов в хромосомы при их переносе. Исследования районов локализации интегрированных генов у трансгенных организмов показали, что интеграция является неспецифической, и трансгены хаотически разбросаны по хромосомам при количестве копий от 1 до более 10, т. е. перенос ДНК в специфические сайты хромосом отсутствовал. Для включения Т-ДНК A. tumefaciens в специфические сайты хромосом арабидопсиса использовали систему бактериофага P1 Cre/lox. Эта система состоит из рекомбиназы Cre и короткого, состоящего из 34 п. о., сайта рекомбинации lox (locus of crossingover), катализирующего точную и стабильную инсерционную рекомбинацию между соответствующими сайтами ДНК. Рекомбиназа Cre вырезает фрагменты ДНК в участках, содержащих последовательности lox бактериофага P1. Система включает в себя следующие элементы: 1) хромосомный вектор lox/neo со случайной интеграцией; 2) специфически интегрирующий вектор lox, встраивающийся в присутствии рекомбиназы Cre в непосредственной близости от встроенного ранее вектора lox/neo; 3) эукариотический вектор экспрессии, приводящий к экспрессии гена Cre и синтезу рекомбиназы Cre. Характерной особенностью рекомбиназы Cre является способность к вырезанию отрезка ДНК, фланкированного последовательностями lox из хромосомной (или внехромосомной) ДНК. Повторное введение экспрессирующего вектора в клетки приводит к удалению последовательностей, локализованных между последовательностями lox. Были получены линии A. thaliana, несущие одну химерную вставку, состоящую из промотора, последовательности lox и гена Cre. Экспланты корней трансгенных растений при культивировании со штаммом агробактерии, несущим вектор Т-ДНКсо слитой последовательностью lox — ген NPTII без промотора, характеризовались индуцированной Cre сайт-специфической рекомбинацией. Интеграция Т-ДНК в сайт lox восстанавливала активность NPTII. Одновременно ген рекомбиназы разъединялся с промотором, предохраняя от эксцизии. Из общего количества сайт-специфических рекомбинантов 89% характеризовались точной интеграцией. Альтернативным, хотя и более трудоемким, подходом к достижению избирательной экспрессии трансгенов является их введение сразу под контроль эндогенных регуляторных элементов клетокмишеней, которые присутствуют в сайте интеграции. Известно, что аденоассоциированный вирус дикого типа осуществляет сайт-специфическую интеграцию своего генома в хромосому 19 человека и что такая специфичность сохраняется и в ряде генно-инженерных конструкций, полученных с его использованием. Однако векторы на основе ДНК аденоассоциированных вирусов не могут нести вставку, размер которой превышает 25 п. о., что ограничивает их практическое использование.


Генетика. Энциклопедический словарь. - Минск: Белорусская наука. . 2011.

Игры ⚽ Нужно решить контрольную?

Полезное



Поделиться ссылкой на выделенное

Прямая ссылка:
Нажмите правой клавишей мыши и выберите «Копировать ссылку»